熒光定量PCR反應(yīng)就是從RNA反轉(zhuǎn)錄至cDNA，然后通過PCR反應(yīng)擴增cDNA的過程。Super一步法RT-PCR(AMV)試劑盒采用了一步反應(yīng)法完成整個RT-PCR反應(yīng)，即RNA-cDNA-PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進行，反應(yīng)過程中不需增加額外的步驟，就可完成整個RT-PCR反應(yīng)，同時整個反應(yīng)系統(tǒng)且含有電泳時所需要的試劑，可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡捷、靈敏度高、重復(fù)性好的特點，可適用于各種動、植物、病毒RNA的PCR檢測。
 

　　熒光定量PCR使用注意事項：
 

　　1.平臺效應(yīng)：PCR不能進入平臺期，出現(xiàn)平臺效應(yīng)與所擴增的目的基因的長度、序列、二級結(jié)構(gòu)以及目標DNA起始的數(shù)量有關(guān)。故對于每一個目標序列出現(xiàn)平臺效應(yīng)的循環(huán)數(shù)，均應(yīng)通過單獨實驗來確定。
 

　　2.防止DNA的污染：①采用DNA酶處理RNA樣品；②在可能的情況下，將PCR引物置于基因的不同外顯子，以消除基因和mRNA的共線性。
 

　　3.RNA提取試劑盒：目前試劑公司有多種RNA提取試劑盒、cDNA試劑盒、PCR試劑盒以及RT-PCR試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。如果使用試劑盒，具體操作步驟請參照試劑盒說明書。
 

　　熒光定量PCR的使用方法和用途：
 

　　1.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(一步法)
 

　　1)適合科研單位檢測，或單位內(nèi)檢，用PCR法檢測細胞或其他生物基質(zhì)。
 

　　2) 比藥典操作標準合并了一步，(將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中)，操作更簡潔。
 

　　3)樣本量為2μl，靈敏度為20個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準確。
 

　　2.支原體常規(guī)PCR檢測試劑盒(經(jīng)典法，不含Taq酶)
 

　　1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質(zhì)檢。
 

　　2)樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。
 

　　3)試劑盒中不含Taq酶，需另外購買。
 

　　4) 廠家可協(xié)助完善方法驗證步驟。